抗犬新孢子虫MIC6单克隆抗体的制备及鉴定

摘要：

目的 制备抗犬新孢子虫MIC6单克隆抗体,并进行鉴定.方法 用重组蛋白pGEX-MIC6作为抗原免疫BALB/c小鼠,收集脾细胞,与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,对融合后的杂交瘤细胞进行筛选后,经腹腔注射BALB/c小鼠,制备腹水,鉴定单抗的亚类.采用辛酸-硫酸铵法结合蛋白亲和层析柱纯化腹水,SDS-PAGE分析抗体的相对分子质量,间接ELISA法检测抗体效价及特异性,BCA蛋白浓度检测试剂盒测定抗体浓度.结果 最终获得两株能稳定分泌新孢子虫MIC6蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株1A1和1H11,分泌的抗体分别属于IgG1和IgG2b亚类.纯化后的腹水经SDS-PAGE分析,分别可见相对分子质量约为50 000的重链和25 000的轻链条带,纯化效果较好;1A1和1H11的腹水效价分别为5.12×104和1.024×105,浓度分别为0.935和2.010 mg/ml,两株单抗均能特异性识别新孢子虫,与弓形虫无交叉反应.结论 制备的抗犬新孢子虫MIC6单克隆抗体特异性较强,为进一步研究新孢子虫MIC6的生物学功能及建立特异敏感的新孢子虫检测方法奠定了基础.

关键词：新孢子虫、MIC6、单克隆抗体

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分类号：S855.9;R392-33(动物医学（兽医学）)

资助基金：“国家重点基础研究发展计划973计划”2015CB150300;国家质检公益性行业专项201410061;吉林省科技发展计划项目20100222.

在线出版日期：2015-03-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1565-1568