乙型肝炎病毒基因组C区启动子突变位点新型检测方法的建立、验证及初步应用

摘要：

目的 利用错配扩增和荧光PCR技术,建立一种针对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)基因组C区启动子(basal core promoter,BCP) 1762/1764突变位点的新型检测方法,并对该方法进行验证及临床评价.方法 根据NCBI登录的HBV A-H型基因序列(以GenBank号为AB033556.1的C基因型作为标准参考序列)合成野生型和突变型标准品序列,测序后连接至pMD-18T载体上,构建质粒标准品,设计引物、探针及合适的突变检测体系,确定检测的线性范围;对建立的方法进行灵敏度、重复性、特异性、稳定性验证;分别用本实验建立的ARMS-PCR法和基因Sanger测序法(金标准)检测132份慢性乙型肝炎患者血液样本的基因位点是否发生突变,并分析ARMS-PCR法的灵敏度和特异度.结果 ARMS-PCR法能检测l×102～l×109 copies/ml的野生型和突变型质粒;野生型和突变型样本检测的Ct差值(△Ct)在7以上,且能检出最低达1％突变含量的混合质粒和样本;该方法灵敏度较高,重复性、特异性、稳定性良好;其检测132份慢性乙型肝炎患者血液样本1762/1764位点突变阳性率为41.7％,明显高于Sanger 测序法检测结果(P＜0.05).结论 建立的ARMS-PCR法能很好地用于评估乙肝患者患肝癌的风险,且较Sanger测序法检测精度更高,更适合于临床推广.

关键词：乙型肝炎病毒、肝癌、基因组C区启动子、1762/1764突变、扩增阻碍突变系统、聚合酶链反应

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分类号：R373.2+1;R735.7(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：“艾滋病与病毒性肝炎等重大传染病防治”科技重大专项-传染病核酸诊断试剂的研制2013ZX10004802.

在线出版日期：2014-12-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1313-1320