柯萨奇病毒A组16型抗原定量检测ELISA方法的建立及初步应用
目的 建立柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus group A type 16,CA16)抗原定量检测的ELISA方法,用于CA16疫苗中抗原的定量检测.方法 以纯化的CA16病毒颗粒作为免疫原,分别免疫家兔和BALB/c小鼠,制备抗CA16多克隆抗体和单克隆抗体.以抗CA16多抗作为包被抗体,经HRP酶标记的单抗作为酶标抗体,建立CA16抗原定量检测的双抗体夹心ELISA方法,确定该方法的线性范围,并进行准确度、精密度、稳定性及特异性验证.用建立的方法检测CA16疫苗原液制备过程样品中CA16抗原含量.结果 以抗CA16多抗为包被抗体,针对74株不同基因型的CA16的ELISA检测结果均为阳性,该抗CA16单抗的广谱性较好.该方法的线性范围为23.4 ～ 750 ng/ml,R2＞0.99,最小检出量为23.4 ng/ml;样品回收率在89％～108％之间,CV＜15％,准确度和精密度较好;抗体包被板干燥后于37 cc放置6d,CV＜20％,稳定性较好;PV纯化样品、EV71收获液、Vero细胞样品中抗原的A值均小于cutoff值,特异性较好.随着CA16疫苗制备过程的不断进行,中间品1～4比活分别为0.44、0.64、92.13和1 239.03,呈逐渐上升趋势.结论建立了CA16抗原定量检测的双抗体夹心ELISA方法,该方法准确度、精密度高,稳定性及特异性较好,为CA16疫苗的研制及工艺开发奠定了基础.
柯萨奇病毒A组16型、抗原、酶联免疫吸附法
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R373.2+3(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
十二五“重大新药创制”科技重大专项2013ZX09402302;北京市科委基金资助Z131100006513007;国药新产品基金2013SW03.
2014-12-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
1288-1294
