变形链球菌组氨酸蛋白激酶VicK原核表达、纯化及其蛋白活性检测

摘要：

目的 原核表达及纯化变形链球菌组氨酸蛋白激酶VicK,并进行蛋白活性的检测.方法 以变形链球菌UA159菌株基因组DNA为模板,PCR扩增VicK基因,插入表达载体pET-28a中,转化大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)中,IPTG(终浓度为0.01、0.02、0.05、0.1、0.2及0.3 mmol/L)于18及37℃诱导10、15、20 h,表达产物经Ni离子亲和层析柱纯化,采用Kinase-Glo(R)激酶发光检测试剂盒检测纯化后目的蛋白的活性.结果 重组表达质粒pET-28a-VicK经双酶切及测序鉴定,证明构建正确;表达的重组VicK蛋白相对分子质量约51 000;IPTG终浓度0.3 mmol/L,18℃诱导15 h,可溶性目的蛋白的表达量最高;纯化的目的蛋白纯度＞90％,浓度为2 mg/ml;随着VicK蛋白浓度的增加,发光值逐渐降低,表明该蛋白具有体外水解ATP的激酶活性.结论 已成功原核表达并纯化了变形链球菌具有激酶活性的VicK蛋白,为后续以此为靶点的抑制物的筛选奠定了实验基础.

关键词：链球菌、组氨酸、蛋白激酶、原核细胞、基因表达、纯化、激酶活性

所属期刊栏目：26

分类号：Q789(基因工程（遗传工程）)

资助基金：重庆市卫生局科研项目2011-2-188;重庆市中医药局科研项目2010-2-64;重庆市科委自然科学基金项目cstc2011jjA10028

在线出版日期：2013-12-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1577-1579,1584