刚地弓形虫热休克蛋白70编码基因的克隆表达及生物信息学分析

摘要：

目的 克隆并表达刚地弓形虫热休克蛋白70(TgHsp70)编码基因,并对重组 TgHsp70(rTgHsp70)的抗原表位进行生物信息学分析.方法 收集、纯化RH株弓形虫速殖子,提取总RNA,RT-PCR扩增TgHsp70编码基因,插入原核表达质粒pET30a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE、Western blot进行检测,并采用相关生物信息学软件对重组蛋白结构和表位特征进行分析.结果 从弓形虫RH株cDNA中扩增出495 bp的TgHsp70部分编码基因,重组表达质粒pET30a(+)/TgHsp70经PCR和双酶切鉴定构建正确;目的基因在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,rTgHsp70相对分子质量约18 000,其能被兔抗弓形虫血清识别;rTgHsp70存在多个功能位点及潜在的抗原决定簇.结论 已在原核表达系统中高效表达了RH 株TgHsp70,该重组蛋白有多个抗原表位,具有抗原性,有望作为弓形虫疫苗的候选抗原.

关键词：弓形虫、热休克蛋白质类、原核细胞、基因表达、抗原性、生物信息学

所属期刊栏目：23

分类号：R382.5(医学寄生虫学)

资助基金：国家自然科学基金30640057;81071374

在线出版日期：2011-03-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1291-1294