人T淋巴细胞CD3ε链的原核表达及纯化

摘要：

目的 原核表达并纯化人T淋巴细胞CD3ε(hCD3ε)链.方法 以健康成人外周血单个核细胞总RNA为模板,采用RT-PCR法扩增人CD3ε链基因,并克隆人pCR-Ⅱ载体,酶切鉴定及测序分析后,再定向克隆至原核表达载体pGEX4T-3中,构建重组表达质粒pGEX-4T-3-hCD3ε,转化E. coli BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达产物经GST亲和层析纯化后,进行Western blot鉴定.结果 酶切分析及DNA测序证实,hCD3ε链基因被正确克隆入pGEX-4T-3载体,并能在原核系统中稳定表达.表达产物的相对分子质量为49 500,0.2mmol/LIPTG 25℃诱导表达4.5 h,目的蛋白的表达量最高,占菌体总蛋白的29.3%,其中可溶性表达占12.8%.纯化的融合蛋白纯度可达86.1%,可分别被兔抗人CD3ε多抗和羊抗GST多抗识别.结论 已成功地原核表达并纯化了GST-hCD3ε融合蛋白.

关键词：人T淋巴细胞、CD3ε链、原核表达、纯化

所属期刊栏目：22

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2009-08-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：647-650