重组hTRAIL腺病毒载体的构建及鉴定

摘要：

目的 构建表达hTRAIL基因的重组腺病毒载体.方法 以重组质粒pThioHisA-TRAIL中提取的TRAIL基因为模板,采用PCR法扩增基因片段.将扩增的基因片段插入穿梭质粒pShuttle-CMV,并转化大肠肝菌DH5α.筛选重组质粒pShuttle-CMV-TRAIL,电转化已转化了pAdEasy-1的BJ5183细胞.筛选重组腺病毒质粒pAdEasy-TRAIL,用Lipofectamine转染293细胞,制备携带人全长TRAIL基因的重组复制缺陷型腺病毒(Ad-TRAIL).氯化铯密度梯度离心法纯化Ad-TRAIL病毒颗粒,并测定病毒滴度.采用RT-PCR法检测TRAIL基因在293细胞中的转录.以Ad-TRAIL转染YTMLC细胞,采用免疫荧光法和流式细胞术检测TRAIL基因的表达.结果 纯化后的Ad-TRAIL病毒颗粒数为2.77×1012VP/ml,感染性滴度为109.5(3.2×109)CCID50/ml.经RT-PCR扩增出约843bp的基因片段,与目的片段大小一致.流式细胞术和免疫荧光法均检测到TRAIL在YTMLC细胞中的表达,表达产物主要存在于细胞质中.结论 已成功构建了表达hTRAIL重组腺病毒载体,为肿瘤的基因治疗提供了依据.

关键词：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体、重组腺病毒、基因治疗、构建、鉴定

所属期刊栏目：20

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2007-10-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：637-641