截断型人可溶性CD40L的表达与纯化

摘要：

目的表达相对分子质量18 000的截断型人可溶性CD40L.方法针对人CD40L(Glu108-Leu261)设计引物,以全长人CD40L为模板,扩增目的基因,经pGEM-T中间载体进一步连接到pQE-40载体,构建pQE/sCD40L表达载体.转化E.coliM15后经IPTG诱导表达,分离、洗涤包涵体,并利用Ni-NTA亲和层析纯化目的蛋白,经复性后检测对骨髓瘤细胞SP2/0细胞株的抑制作用.结果克隆的目的基因为480bp,经测序与文献报道一致,所构建的菌株(M15/PQE/sCD40L)经诱导表达目的蛋白量为26.7%,相对分子质量为18 000,纯化后蛋白纯度为96.5%,对SP2/0细胞有生长抑制作用.结论原核表达的截断型人可溶性CD40L具有抑制肿瘤细胞生长作用.

关键词：CD40L、包涵体、亲和层析、SP2/O细胞

所属期刊栏目：17

分类号：R392

资助基金：广东省科技攻关项目2002B30106;广东省广州市科技攻关项目2003Z1-E0084

在线出版日期：2004-12-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：365-368