蛇毒金属蛋白酶抑制剂基因的合成及杆状病毒表达载体的构建

摘要：

研究蛇毒金属蛋白酶抑制剂(BJ46a)基因的合成及杆状病毒表达载体的构建.根据GenBank中查找的BJ46a基因序列(AF294836),将其分为20个片段,通过缓慢退火PCR法使之拼接为完整的BJ46a基因,经Sac Ⅰ及Xho Ⅰ双酶切后定向克隆到载体pET-42a(+)中,PCR扩增、酶切及测序鉴定;根据测序结果用定点突变法逐一改正错误位点.随后将该基因插入到转座载体pFastBac HT C的MCS中,转化大肠杆菌DH5 α-T1,以LB/AP平板筛选阳性重组子,PCR扩增、酶切鉴定,提取pFastBac HT C-BJ46a重组体进一步转化DH10Bac感受态细胞,48h后通过蓝白筛选,挑取单个白色菌落划线,证实所得菌落均为白斑,挑克隆PCR鉴定.结果 表明成功构建杆状病毒重组转座载体、重组穿梭载体.含BJ46a基因的重组杆状病毒感染Sf 9昆虫细胞,获得目的蛋白的表达.BJ46a基因的合成及杆状病毒表达载体的成功构建,为进一步研究其生物学功能奠定了坚实的基础.

关键词：蛇毒金属蛋白酶抑制剂(BJ46a)、基因合成、基因克隆、基因突变、重组杆状病毒载体

所属期刊栏目：25

分类号：R318(医用一般科学)

资助基金：福建省科技攻关项目XZ04002;福建省高技术产业项目闽发改2004-686

在线出版日期：2007-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：755-764