九种核酸提取裂解剂对PCR扩增效率影响研究
目的 探究6种化学试剂型和3种酶型菌体裂解剂在聚合酶链式反应(PCR)扩增体系中的最大允许终浓度和不同浓度IGEPAL CA-630裂解不同种属菌株的差异.方法 配制6种化学试剂型(IGEPAL CA-630、CTAB、SDS、EDTA、异硫氰酸胍和NaOH)和3种酶型(溶菌酶、溶葡球菌酶和蛋白酶K)及多个不同稀释度的裂解液,添加于荧光定量PCR体系中,分析比较Ct值差异.用IGEPAL CA-630溶液(浓度为1％和0.1％,TE为溶剂)、TE和去离子水分别裂解嗜热链球菌、金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌,经荧光定量PCR扩增,比较Ct值的差异.结果 在PCR体系中,IGEPAL CA-630、CTAB、SDS、EDTA异硫氰酸胍和NaOH的最大允许终浓度分别为0.800‰、0.256‰、0.012 8‰、0.8 mmol/L、0.012 8 mol/L 和 0.64 mmol/L,溶菌酶、溶葡球菌酶和蛋白酶 K 的最大允许浓度分别为0.512、1.28和0.512 μg/mL.IGEPAL CA-630裂解嗜热链球菌和金黄色葡萄球菌实验中,TE溶液、0.1％和1％IGEPAL CA-630的Ct值依次减小,TE溶液和去离子水的Ct值没有明显差异;去离子水、TE溶液、0.1％和1％IGEPALCA-630裂解大肠埃希菌的Ct值均没有明显差异.结论 通过探究,明确了上述9种常见裂解剂不影响PCR扩增的最大浓度,且适当提高IGEPAL CA-630浓度可以增强提取革兰氏阳性菌DNA作用.
聚合酶链式反应、裂解剂、化学试剂型、酶型、种属
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R155(营养卫生、食品卫生)
中国食品药品检定研究院中青年基金2020C3
2023-10-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
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