人偏肺病毒的逆转录重组酶介导等温扩增荧光检测方法的建立

摘要：

目的 建立一种基于逆转录重组酶介导的等温扩增(reverse transcription recombinase-aided isothermal amplifi-cation,RT-RAA)方法的人偏肺病毒快速分子诊断技术,并对其检测效果进行初步分析.方法 从NCBI数据库中下载人偏病毒基因组序列,利用Mega软件比对分析基因组序列,确定高度保守序列作为分子检测靶标.以人偏肺病毒N蛋白基因保守序列作为靶序列,设计引物和荧光探针.并以宁波地区人偏肺病毒基因组RNA为模板,利用实时荧光定量PCR对荧光RT-RAA检测体系进行评价.以构建含有N蛋白基因序列的不同浓度重组质粒为模板进行RT-RAA荧光扩增,分析其检测灵敏性;利用建立的RT-RAA荧光法分析检测人偏肺病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒和博卡病毒基因组,评价其检测特异性.结果 成功建立了人偏肺病毒RT-RAA扩增荧光检测方法,可在30 min内完成偏肺病毒的特异性扩增检测.以重组质粒为检测模板,RT-RAA荧光检测法的最低检出限为102拷贝/μL重组质粒,且均在15 min内出现阳性特异性扩增.与实时荧光定量PCR检测一致性达98.6％,且与其他3种病毒无交叉反应特性.结论 成功建立了一种基于RT-RAA扩增的人偏肺病毒荧光检测方法,该方法灵敏度高、特异性好,在人偏病毒快速现场检测中具有潜在应用价值.

关键词：人偏肺病毒、重组酶介导的等温扩增、分子检测、检测效果

所属期刊栏目：39

分类号：R373.1(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2023-10-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：780-783