表达呼吸道合胞病毒融合前F蛋白的重组人5型腺病毒的构建

摘要：

目的 筛选并构建成功表达A亚型人呼吸道合胞病毒(Human Respiratory Syncytial Virus,HRSV)融合前构象F蛋白的重组人5型腺病毒(Recombinant Human type5 adenovirus,rHADV-5),为制备和研发HRSV重组腺病毒载体疫苗奠定基础.方法 在真核表达载体pcDNA3.1(+)上插入具有不同突变位点的HRSV F蛋白编码序列,利用融合前F蛋白单克隆抗体AM14和D25筛选HRSV F蛋白突变体;通过同源重组将筛选出的前构象F蛋白突变体编码序列插入非复制型人5型腺病毒载体,在HEK293细胞中进行重组病毒的包装和扩增,经氯化铯密度梯度法获得纯化的重组病毒;应用夹心ELISA法和Western blot鉴定F蛋白的表达及构象.结果 通过AM14和D25单克隆抗体筛选出了 2个稳定维持在融和前构象的HRSV F蛋白序列(SC-3M和SC-5M).将SC-3M和SC-5M编码序列插入非复制型人5型腺病毒载体,对两种重组人5型腺病毒(pAd5-SC-3M 和 pAd5-SC-5M)和空载体(pAd5-vector)纯化,病毒滴度分别达到 2.016 × 1010,2.52 × 1010和 2.948× 1011 IU/mL.pAd5-SC-3M和pAd5-SC-5M感染HEK293后均能高效表达HRSV融合前构象的F蛋白并维持三聚体结构,且pAd5-SC-5M感染细胞中F蛋白表达量高于pAd5-SC-3M.结论 成功在体外传代细胞中获得可高效表达A型HRSV融合前F蛋白的重组人5型腺病毒,为进一步通过动物试验评价该HRSV重组腺病毒载体疫苗奠定了基础.

关键词：人5型腺病毒载体、人呼吸道合胞病毒、融合前F蛋白、HEK293细胞

所属期刊栏目：39

分类号：R373(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2023-08-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：515-522