基于CRISPR/Cas12a的室温稳定鼠疫耶尔森氏菌检测体系的建立

摘要：

目的 筛选并优化冻干保护剂组合,建立可室温稳定储存的、不影响试剂检测灵敏度的Cas12a鼠疫菌核酸检测冻干体系,为其应用于动物鼠疫监测的现场快速检测奠定基础.方法 以鼠疫耶尔森氏菌pla基因为靶基因,选择9种常用冻干保护剂加入核酸检测试剂中,筛选有明显保护效果的4种保护剂进行优化.按照正交实验设计原则设计保护剂组合,通过37℃加速破坏实验及26℃室温稳定性实验对复合保护剂进行保护效果和灵敏度评价.结果 加入蔗糖、山梨醇和海藻糖3种保护剂的冻干检测体系可在37 ℃稳定存放2周.室温下存放3个月后体系检测信号强度与37 ℃加速破坏1周时基本相当,同时检测方法的灵敏度依然能达到10-5 ng/μL,说明Cas12a检测试剂加入筛选得到的保护剂冻干后,可在室温下稳定保存至少6个月.结论 本研究构建的室温稳定CRISPR/Cas12a鼠疫菌检测体系可在室温下稳定存放至少半年,能够满足鼠疫菌现场快速检测中对试剂稳定性的需求.同时,本研究获得的复合保护剂组分对构建其它室温稳定CRISPR/Cas12a核酸检测体系具有重要参考价值.

关键词：稳定性、鼠疫耶尔森氏菌、Cas12a、冻干保护剂、核酸检测

所属期刊栏目：39

分类号：R378.6+1(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金No.32070136

在线出版日期：2023-07-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：419-425