针对SARS-CoV-2核衣壳蛋白的单克隆抗体的制备和鉴定

摘要：

目的 研制SARS-CoV-2的N蛋白单克隆抗体,并对其特异性识别真核表达N蛋白等特性进行鉴定,为下一步应用奠定材料基础.方法 利用大肠杆菌表达并纯化SARS-CoV-2重组N蛋白,制备并筛选分泌N蛋白特异性单克隆抗体的阳性B细胞杂交瘤,制备腹水后利用间接ELISA法测定单抗的效价、亚型和亲和力;通过Western blot、间接免疫荧光试验分析其与原核、真核表达SARS-CoV-2重组N蛋白的特异性结合能力;通过间接ELISA法评价其在不同冠状病毒N蛋白检测中的应用潜力.结果 成功地表达和纯化SARS-CoV-2重组N蛋白,筛选获得1株特异性识别重组N蛋白的单克隆抗体并命名为11F4,其亚型为IgG1,腹水效价为2.0×107以上,亲和力为4.44×108 M-1;Western Blot分析表明其能与SARS-CoV-2重组N蛋白特异性反应,间接免疫荧光试验显示其能特异性识别HEK-293T细胞表达的SARS-CoV-2 N蛋白,表明该蛋白免疫反应性良好;间接ELISA法结果表明其可特异性识别真核细胞表达的SARS-CoV-2 N蛋白,而与MERS-CoV和HCoV-229E的N蛋白无交叉反应.结论 成功获得可特异性识别细胞表达及体外制备的SARS-CoV-2 N蛋白的单克隆抗体,具备特异性检测SARS-CoV-2的潜能,为下一步研究提供了重要生物材料.

关键词：SARS-CoV-2、核衣壳蛋白、原核表达、真核表达、单克隆抗体、特异性

所属期刊栏目：38

分类号：R373.1+9(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：江苏省重点研发计划现代农业重点项目;国家自然科学基金;高等学校学科创新引智计划

在线出版日期：2023-03-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：20-27