ANXA2敲除的A549细胞系的构建及其对H1N1和H9N2流感病毒复制的影响

摘要：

目的 旨在利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建ANXA2敲除的A549细胞,并探索ANXA2敲除对流感病毒复制的影响.方法 本研究设计了 3对靶向ANXA2基因外显子的特异性sgRNAs,分别将sgRNAs构建到LentiCRISPRv2载体上获得重组质粒,与辅助质粒共转染293T细胞包装成慢病毒后感染A549细胞,通过嘌呤霉素压力及有限稀释法筛选ANXA2基因敲除的单克隆细胞株,用靶基因测序及Western-blot验证ANXA2的敲除效果,并通过CCK-8试验比较ANXA2敲除细胞和野生型A549细胞的细胞活力.再分别用人流感病毒WSN(H1N1)和禽流感病毒SD98(H9N2)感染ANXA2敲除和野生型A549细胞,经TCID50检测ANXA2敲除对流感病毒复制的影响.结果 成功获得了 ANXA2敲除的A549细胞系,且与野生型A549细胞相比,细胞活力无显著差异;ANXA2敲除后WSN(H1N1)和SD98(H9N2)流感病毒的病毒滴度均升高,其中ANXA2对SD98(H9N2)流感病毒的影响要大于WSN(H1N1).结论 本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建了 ANXA2敲除的A549细胞,并发现ANXA2敲除促进了流感病毒的复制,本研究为流感病毒复制和致病机制的研究奠定了基础.

关键词：CRISPR/Cas9、膜联蛋白A2、基因敲除、流感病毒

所属期刊栏目：38

分类号：R373.1(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：山东省自然科学基金;山东省重点研发计划项目;大学生创新创业训练计划项目;大学生创新创业训练计划项目

在线出版日期：2022-05-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：291-296,302