2型猪链球菌cps2D基因敲除株的构建及其基本生物学特性的研究

摘要：

目的 构建2型猪链球菌荚膜多糖基因簇中cps2D基因敲除株(△cps2D),比较野毒株05ZYH33与敲除株△cps2D基本生物学特性的差异.方法 设计合成引物L1/L2、R1/R2、Spc1/Spc2,分别扩增cps2D基因上、下游同源臂L片段、R片段及SpcR抗性基因S片段,将3个片段连接至pUC19线性载体上,构建敲除质粒pUC19::cps2D.将敲除质粒电转导入05ZYH33感受态细胞后,利用SpcR抗性平板筛选敲除株,并通过组合PCR和RT-PCR进一步验证.比较野毒株05ZYH33和敲除株△cps2D细菌生长特性、溶血活性、革兰染色、细菌链长、荚膜形态等方面的异同.结果 L1/L2、R1/R2、Spc1/Spc2三组引物分别扩增出L(1 030 bp)、R(1 030 bp)以及S(1 130 bp)基因片段;通过无缝克隆的方法成功构建出敲除质粒pUC19::cps2D;电转入感受态细胞后获得69个克隆,筛选出26个疑似敲除株;组合PCR以及RT-PCR筛选后获得cps2D基因敲除株△cps2D;与野毒株05ZYH33相比,△cps2D对数期生长变缓,链长显著变短,荚膜稀疏变薄.结论 成功构建cps2D基因敲除株,为后续进一步研究其调控荚膜合成的作用机制奠定基础.

关键词：2型猪链球菌、荚膜多糖、酪氨酸激酶Cps2D、基因敲除、生物学性状

所属期刊栏目：38

分类号：R378.1(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金;江苏省自然科学基金面上项目

在线出版日期：2022-05-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：285-290