2型猪链球菌二元信号系统孤儿调控因子CovR磷酸化位点鉴定

摘要：

目的 利用E scherichia coli BL21原核表达系统共表达2型猪链球菌丝氨酸/苏氨酸激酶STK与孤儿调控因子CovR蛋白,通过质谱鉴定CovR蛋白磷酸化位点,探究STK对CovR的磷酸化作用.方法 构建CovR蛋白表达载体pCDF-Duet-1::covR及pCDFDuet-1::covR/stk,重组表达蛋白分别命名为CovR1与CovR2.通过蛋白磷酸化质谱技术检验CovR2蛋白的关键磷酸化位点.分别构建CovR苏氨酸突变体CovRT、丝氨酸突变体CovRS、酪氨酸突变体CovRY及丝/苏/酪氨酸全突变体CovRA,与STK共表达后分析其磷酸化状态,确定CovR磷酸化靶点.结果 在E.coli BL21表达系统中成功表达并纯化CovR1与CovR2蛋白,Western blot分析发现CovR1无磷酸化信号,CovR2可以被磷酸化.进一步对CovR2磷酸化质谱检测发现其第45、148、150、159、168、194、219位苏氨酸,第40、172、215位丝氨酸以及第225位酪氨酸为关键磷酸化位点.对CovRT、CovRS、CovRY及CovRA突变体磷酸化状态检测,结果表明CovR2的丝/苏/酪氨酸均可发生磷酸化.结论 在E.coli BL21中共表达STK与CovR可导致CovR丝/苏/酪氨酸磷酸化,通过质谱技术鉴定了CovR的磷酸化位点,提示CovR可能是STK的磷酸化调控靶点.

关键词：2型猪链球菌、丝氨酸/苏氨酸激酶、孤儿调控因子CovR、磷酸化检测

所属期刊栏目：37

分类号：R378.1+2(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;江苏省自然科学基金面上项目;江苏省自然科学基金面上项目

在线出版日期：2021-07-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：392-397