德国小蠊Bla g 5基因表达、纯化及生物信息学分析

摘要：

目的 德国小蠊(Blattella germanica)的分泌物、排泄物、蜕皮产物和尸体中携带含有大量过敏原,其中Blag5是引起过敏性疾病的一类重要过敏原.使用大肠杆菌克隆表达德国小蠊过敏原Bla g 5,然后使用过敏性疾病患者的血清IgE测试其变应原性.同时使用生物信息学预测Blag 5基因的作用,了解到其分子特征.方法 首先提取德国小蠊的总RNA,并根据已知的Blag5基因序列(GenBank:U92412)设计基因特异性引物.扩增其cDNA,并通过酶切连接构建表达载体pET-28a(+)-Blag5,然后转化入感受态细胞Rosetta(DE3).选择单克隆阳性菌落进行扩增和培养.用0.1 mm/mol IPTG诱导目的蛋白的表达,然后通过金属螯合层析法纯化表达产物,并通过Western印迹法鉴定纯化产物的免疫学特性.结果 对表达产物进行了十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),发现可溶性表达的Bla g 5蛋白的分子量约为25 kDa,与理论结果相符.纯化的重组蛋白的免疫印迹结果表明,Bla g 5可以特异性结合过敏患者的血清IgE.基于基因序列,我们预测了Bla g 5二级和三维结构、亲水性、可塑性、抗原性、表面可及性、同源性.发现其具有典型的谷胱甘肽硫转移酶(GST)特征.结论 本研究中异源表达的德国小蠊Bla g 5过敏原蛋白对过敏患者的血清具有更高的结合活性,为相应的变应性疾病的诊断试剂和疫苗的开发研究奠定了基础.

关键词：德国小蠊、过敏原、Bla g 5、免疫学鉴定、生物信息学分析

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分类号：R378.5(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金;广州市科学研究计划重点项目;深圳市孔雀计划团队项目;深圳市科技计划国际科技合作项目;南山区"领航团队"支持计划项目;呼吸疾病国家重点实验室开放课题

在线出版日期：2021-03-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：975-981,987