2型猪链球菌细胞分裂蛋白GpsB的原核表达及其鉴定

摘要：

目的 利用原核表达系统诱导表达2型猪链球菌(Streptococcus suis 2,S.suis 2)分裂相关因子GpsB重组蛋白,为后续研究奠定基础.方法 以S.suis 2菌株05ZYH33全基因组DNA为模板,经PCR扩增得到目的基因片段.目的基因经双酶切后连接至表达载体pET32a,转化大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)DH5α感受态细胞.重组质粒经测序鉴定正确后转化E.coli BL21感受态细胞.获得的重组表达菌经IPTG诱导表达目的蛋白.利用Ni离子亲和层析柱纯化重组蛋白,并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定.利用重组蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体.结果 成功构建出重组表达载体pET32agpsB,并经IPTG诱导表达出目的蛋白.重组蛋白主要存在于表达菌裂解液上清中,分子质量约30 kD,与预期大小一致.Western blot检测发现,该蛋白能被His-Tag单克隆抗体特异性识别.制备的多克隆抗体能特异性识别重组GpsB蛋白(rGpsB).结论 成功表达和纯化了rGpsB并获得了该蛋白的多克隆抗体,为进一步研究该蛋白在S.suis 2分裂过程中的作用鉴定了基础.

关键词：2型猪链球菌、GpsB、原核表达、多克隆抗体

所属期刊栏目：35

分类号：R378.1(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金.81571965,1172794,81071317;江苏省自然科学基金项目BK20151091;江苏省333工程科研资助项目BRA2014363

在线出版日期：2019-05-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：201-205