弓形虫沉默信号调节子2(TgSir2)的克隆表达与多克隆抗体制备

摘要：

目的 制备特异识别弓形虫沉默信号调节子2 (TgSir2)多克隆抗体.方法 以酵母Sir2氨基酸序列为模板,寻找弓形虫基因组中同源序列,并进行信号肽预测.以弓形虫RH株cDNA为模板,构建pET28b-TgSir2重组质粒,转化入大肠埃希菌(E.coli) BL21,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后,用镍柱亲和层析法纯化诱导表达产物,并以小鼠抗His标签单克隆抗体作为一抗,蛋白质印迹(Western blotting)进行鉴定.以纯化的TgSir2蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔,获得特异性抗TgSir2多克隆抗体.最后,以此多克隆抗体作为一抗,Western blotting检测与虫体蛋白的反应情况.结果 同源比对找到弓形虫基因组中TgSir2,信号肽分析提示1-15位氨基酸为其信号肽序列.PCR、双酶切及测序结果证实原核表达质粒构建成功.SDS-PAGE结果表明,IPTG可诱导TgSir2融合蛋白的大量表达.Western blotting结果显示,制备的多克隆抗体既能特异性识别原核表达的TgSir2蛋白,也能识别弓形虫体内的内源性TgSir2蛋白.结论 制备的抗重组TgSir2蛋白多克隆抗体能特异性识别弓形虫RH株的TgSir2蛋白.

关键词：刚地弓形虫、沉默信号调节子2、蛋白翻译后修饰、组蛋白去乙酰化酶、多克隆抗体

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分类号：R382.5(医学寄生虫学)

资助基金：国家自然科学基金81702024;浙江省科技厅公益技术研究社会发展项目2015C33129;浙江省大学生新苗人才计划项目2017R413019、2017R413062

在线出版日期：2019-04-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：120-125,137