流产衣原体荧光定量PCR方法的建立及小鼠感染菌体载量测定

摘要：

目的 建立荧光定量PCR (qPCR)对流产衣原体的检测方法.在流产衣原体灭活疫苗的生产中,代替具有主观判断影响的涂片染色疫苗效价检测方法.方法 根据流产衣原体富含半胱氨酸的胞质蛋白(envB)基因保守序列设计特异性引物,利用 EnvB-PMD19T阳性质粒为参考标准品,优化了反应条件,进行了敏感性、特异性及重复性试验,检测了感染流产衣原体小鼠的菌体载量.结果 以重组质粒为标准品建立的标准曲线在1×102copies/μL~1×106copies/μL内呈现良好的线性关系,扩增效率为97%.灵敏度试验表明,该检测方法的最低检出限低至10 copies/μL.组内、组间重复性试验的变异系数均小于2 %,具有良好的重复性和稳定性.消化道检测到的菌体载量高于腹腔注射的菌体载量.结论 本研究建立的方法能够有效的检测小鼠相应脏器的菌体含量,为流产衣原体灭活疫苗的效检提供可靠的检测方法.

关键词：Balb/c小鼠、流产衣原体、实时荧光定量PCR、绿色荧光染料

所属期刊栏目：34

分类号：R374(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金："十三五"国家重点研发计划2016YFD0500907;甘肃省科技支撑计划No.1504NKCA054联合资助Supported by the State Key Development Program2016YFD0500907;the Gansu Science and Technology Support Plan1504NKCA054

在线出版日期：2018-05-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：224-229