羊传染性脓疱病毒ORF047基因表达及其蛋白在细胞中的定位分析

摘要：

目的 克隆羊传染性脓疱病毒(Orf virus,ORFV) ORF047基因,并进行真核表达及亚细胞定位,为筛选与其相互作用的蛋白提供依据.方法 提取羊传染性脓疱病毒分离株的DNA,以其为模板,参照OV-SA00毒株(NC-005336.1)基因ORF047序列,采用PCR技术扩增ORFV ORF047基因片段,凝胶回收后将其插入pEGFP-N1载体,构建重组质粒pEGFP-ORF047,测序后重组质粒共转染293T细胞,Western blotting鉴定融合蛋白的表达.后将重组质粒pEGFP-ORF047与pH-cRed1-Nuc、pHCRed1-mito、pHeRed1-ER分别共转染Vero-E6细胞,通过激光共聚焦显微镜对融合蛋白进行亚细胞定位分析.结果 ORFV ORF047基因片段大小为735 bp;重组质粒pEGFP-ORF047能够在293 T细胞中明显表达融合有目的分子的绿色荧光蛋白,Western blotting检测表达的融合蛋白大小约54 kD;亚细胞定位分析表明,ORF047蛋白主要定位于胞浆中,少量在线粒体中.结论 成功分析了ORF047基因的表达与其蛋白在亚细胞定位.

关键词：羊传染性脓疱病毒、ORF047基因、定位

所属期刊栏目：34

分类号：R373(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金31402199;甘肃省农业生物技术研究与应用开发项目GNSW-2012-16;国家重点研发计划No.2017YFD0500903联合资助 Supported by the National Natural Science Foundation of China31402199;the Department of Agricultural Biotechnology Research and Application Development Project,Gansu ProvinceGNSW-2012-16;the National Key Research and Development Projects2017YFD0500903

在线出版日期：2018-05-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：129-132