寨卡病毒E蛋白及第三结构域的原核表达和多克隆抗体制备

摘要：

目的 在大肠杆菌中克隆表达和纯化寨卡病毒(Zika Virus,ZIKV)包膜糖蛋白(Envelope Protein,E)及第三结构域(Envelope DomainⅢ,EDⅢ),并制备两种免疫原的鼠多克隆抗体.方法 通过Vero-E6细胞培养扩增ZIKV,提取病毒总RNA并反转录为cDNA,利用E和EDⅢ基因的cDNA序列构建原核表达载体pET32a/E和pET28a/EDⅢ,转入E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,采用Ni-柱亲和层析法纯化蛋白.以纯化的重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,采集抗血清,间接ELISA法测定效价,Western Blot检测特异性.结果 成功表达并纯化重组蛋白E和EDⅢ,获得的多克隆抗体效价均达到1∶409 600,Western Blot检测多克隆抗体可特异性识别重组E蛋白和EDⅢ以及天然E蛋白.结论 成功制备出特异性抗寨卡病毒E蛋白和EDⅢ的鼠源多克隆抗体,为深入探索寨卡病毒致病机制、检测方法和免疫策略奠定了研究基础.

关键词：寨卡病毒、E蛋白、原核表达、多克隆抗体

所属期刊栏目：34

分类号：R373.9(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：the National Major Infectious Diseases2013ZX 1004103-004;the National Natural Science Foundation of ChinaU1602223;the Army Logistics Scientific Research Projects.AWS16J020,AWS16J021,AWS16J023,BWS14J025,BWS14C051;the Social Development Project of Jiangsu ProvinceNo.BE2017620国家重大传染病专项2013ZX1004103-004;国家自然科学基金项目U1602223;军队后勤科研计划项目AWS16J020,AWS16J021,AWS16J023,BWS14J025,BWS14C051;江苏省社会发展项目BE2017620

在线出版日期：2018-04-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：23-28