牛呼吸道合胞体病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立

摘要：

目的 建立牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)检测方法.方法 以重组纯化的BRSV-G蛋白免疫家兔和小鼠,制备抗G蛋白的多克隆抗体(PcAb)和单克隆抗体(MAb),方阵滴定法优化DAS-ELISA方法抗体工作浓度及反应条件,并对其敏感性、特异性、符合率进行验证.结果 获得5株稳定分泌抗G蛋白MAb的杂交瘤细胞株,分泌抗体亚类均为IgG1型κ链,Western blot、IFA试验表明PcAb和MAb均与G蛋白和BRSV发生特异性反应,MAb作为捕获抗体的最佳包被浓度为2.5 μg/mL,PcAb作为检测抗体最佳工作浓度为5 μg/mL,判定临界值为0.22,最低检测限为1.43 μg/mL,批内和批间重复性试验变异系数均小于10％,与常引起牛呼吸道疾病的几种病原均无交叉反应,与RT-PCR的敏感性、特异性、符合率分别为92.0％、100％、95.6％.结论 建立的检测BRSV的DAS-ELISA方法可用于临床样品的大规模检测,为BRSV疫情的监测和快速诊断奠定了基础.

关键词：牛呼吸道合胞体病毒、G蛋白、多克隆抗体、单克隆抗体、DAS-ELISA

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分类号：R373.1(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：the Graduate Student Innovation Research Project in Heilongjiang Bayi Agricultural UniversityYJSCX2016-Y18;the Funded Projects by Department of Education in Heilongjiang Province No.12521372黑龙江八一农垦大学研究生创新科研项目YJSCX2016-Y18;黑龙江省教育厅资助项目12521372

在线出版日期：2017-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：628-636