2型猪链球菌FtsZ重组蛋白的制备及其酶活性测定

摘要：

目的 制备2型猪链球菌丝状温度敏感蛋白(Filamentous temperature-sensitive protein Z,FtsZ)重组蛋白并测定其水解三磷酸鸟苷(GTP)的酶活性.方法 从2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33基因组中PCR扩增目的基因sz,构建重组表达质粒pET28a-ftsz,转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,筛选阳性转化子进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定表达产物,Ni2+亲和层析柱纯化重组蛋白,Western blot分析.重组蛋白免疫新西兰兔后收集多抗血清,间接ELISA法检测抗体效价,用孔雀绿-磷酸检测法测定FtsZ重组蛋白的GTP酶活性.结果 成功构建pET28a-ftsz重组表达质粒;纯化获得大量纯度较高的FtsZ重组蛋白;ELISA检测兔多抗血清效价达1∶13 107 200;Western blot显示FtsZ重组蛋白能够与His-Tag单抗和兔多抗血清发生反应;以GTP为底物检测重组蛋白具有GTP酶活性.结论 成功制备了具有GTP酶活性的2型猪链球菌FtsZ重组蛋白并以重组蛋白为抗原制备出高效价的多抗血清,为进一步研究2型猪链球菌FtsZ在细胞分裂调控过程中的作用奠定基础.

关键词：2型猪链球菌、丝状温度敏感蛋白、纯化

所属期刊栏目：33

分类号：R378.1(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金81571965,81471920;江苏省自然科学基金BK20151091;江苏省333工程科研资助项目BRA2014363;the National Natural Science Foundation of China.81571965 & 81471920;the Natural Science Foundation of Jiangsu ProvinceBK20151091;the 333 Engineering Science Foundation of Jiangsu ProvinceBRA2014363

在线出版日期：2017-05-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：250-255