猬裂头蚴27kD半胱氨酸蛋白酶基因的克隆、表达及生物信息学分析

摘要：

目的 克隆、表达猬裂头蚴27 kDa半胱氨酸蛋白酶(Cysteine protease,CP)基因,并分析其生物学特性.方法 提取蛇源猬裂头蚴总RNA,逆转录合成cDNA,PCR扩增27kDa半胱氨酸蛋白酶(27kDa CP)基因,克隆入pMD-19T载体,测序正确后将27kDa-CP基因亚克隆入表达载体pET-28a(+),构建pET-28a(+)-27kDa-CP重组质粒,转入大肠埃希菌Tran-setta(DE3)中,经IPTG诱导,表达目的蛋白27kDa CP.用镍离子柱亲和层析法纯化目的蛋白.表达产物用SDS-PAGE及Western Blotting进行分析,并运用NCBI和ExPASy等有关的生物信息学分析工具,对27 CP基因及其编码蛋白进行预测和分析.结果 CP基因序列的开放阅读框长为1 011 bp,去除信号肽序列长954 bp,登录到GenBank,获得登录号ANA52569.该基因编码一个含317个氨基酸的蛋白多肽,属于Peptidase_C39_like超家族,理论分子量约35 669.9 Da,等电点5.92.pET-28a(+)-27kDa-CP重组质粒经IPTG诱导后,蛋白在大肠埃希菌中成功表达,经纯化后的蛋白利用Western blotting检测,证明与预期大小相符,且与猬裂头蚴感染阳性血清有较好的结合反应.结论 成功克隆、表达了猬裂头蚴27kDa CP基因,获知CP基因及其编码的氨基酸序列和生物信息学.

关键词：猬迭宫绦虫、裂头蚴、半胱氨酸蛋白酶基因、原核表达、生物信息学

所属期刊栏目：33

分类号：R383(医学寄生虫学)

资助基金：the Science and Technology Department of Guizhou Province2014-3024;贵州省科技厅社会发展攻关项目20143024

在线出版日期：2017-04-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：120-125