犬恶丝虫天冬氨酸转氨酶基因的原核表达及分析

摘要：

目的 了解犬恶丝虫天冬氨酸转氨酶(AspAT)基因特征及其在虫体的定位,对犬恶丝虫AspAT (DiAspAT)基因进行了原核表达和免疫荧光定位分析.方法 从犬恶丝虫成虫转录组数据库中筛选到DiAspAT基因序列,通过RT-PCR方法克隆DiAspAT基因,利用相关软件进行生物信息学分析;构建原核表达载体pET32a(+)-AspAT并进行诱导表达;表达产物经Ni-NTA层析柱纯化后进行Western blotting分析;通过免疫组化技术观察DiAspAT蛋白在犬恶丝虫虫体内的定位分布.结果 DiAspAT基因的ORF框长度为1 221 bp,编码406个氨基酸,理论相对分子量45.731 8 kDa,等电点为8.05,表达的重组蛋白约为64 kDa;Western blotting显示AspAT重组蛋白能被犬恶丝虫阳性血清识别;间接免疫荧光染色结果显示,DiAspAT在犬恶丝虫的侧索、皮下组织、肌细胞、假体腔壁、子宫及肠上皮、发育的胚胎中分布.结论 成功克隆和表达了DiAspAT基因,并完成DiAspAT在雌性犬恶丝虫成虫上的定位,为进一步了解犬恶丝虫的生理代谢及犬恶丝虫病的诊断和防控奠定基础.

关键词：犬恶丝虫、AspAT基因、克隆、原核表达、免疫荧光定位

所属期刊栏目：32

分类号：R383(医学寄生虫学)

资助基金：the Research Foundation of Chengdu Giant Panda Breeding CPF-2014-09成都大熊猫繁育研究基金项目CPF2014-09

在线出版日期：2016-10-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：700-705