基于样品检测的布鲁氏菌荧光定量PCR方法的建立

摘要：

目的 本文建立一种基于样品检测的特异性好、灵敏性高的布鲁氏菌荧光定量PCR检测方法.方法 以哺乳动物beta-actin基因和外源重组质粒为内参,针对布鲁氏菌属特异性基因IS711,建立用于样品检测的布鲁氏菌荧光定量PCR方法,并验证其敏感性、特异性及稳定性,绘制标准曲线.将该方法用于哺乳动物样品检测,并与细菌分离培养检测结果比较.结果 荧光定量PCR方法对布鲁氏菌检测有良好的特异性,3对引物对阴性对照菌均无非特异性扩增;该方法用于样品检测的最低检测限为17拷贝;内外源内参同时存在条件下,布鲁氏菌荧光定量PCR的标准曲线相关系数为R2=0.997(Y=-3.12X+40.9).将该方法直接用于181份动物样本的检测,并与分离培养结果相比,荧光定量PCR检测阳性率为11.4％,细菌分离培养检测阳性率为9.9％,且细菌分离培养阳性样品与荧光定量PCR阳性样品中编号基本一致.结论 本文建立的荧光定量PCR检测方法灵敏性高、特异性及稳定性好,可直接应用于样品的检测,检测结果受内参基因质控.

关键词：布鲁氏菌、荧光定量PCR、外源内参、内源内参

所属期刊栏目：32

分类号：R378(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：宁夏地区主要人兽共患病防控关键技术研究与示范2013ZZN30;Ningxia main zoonosis prevention and control key technology research and demonstrationno.2013ZZN30

在线出版日期：2016-06-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：469-472