反转录环介导等温扩增技术对丙型肝炎病毒可视化分型检测

摘要：

目的 应用反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP)可视化检测丙型肝炎病毒(HCV)1b和2a基因型,为RT-LAMP技术应用于现场或基层医院提供初步探索经验.方法 首先,收集临床阳性样本并用荧光定量PCR分型检测,把样本基本分为1型和非1型.然后分别根据HCV 1b和2a基因型设计RT-LAMP引物并优化反应条件,通过互换模板实验验证这2套引物的特异性,并通过检测稀释的模板以验证引物的灵敏度.同时用钙黄绿素进行产物显色,使HCV分型检测可视化.最后用RT-LAMP方法检测临床样本,并计算阳性率,应用配对卡方检验比较RT-LAMP和荧光定量PCR的统计学差异.结果 优化好的RT-LAMP体系的特异性好,对HCV 1b型的检测灵敏度为103 IU/mL,2a型的检测灵敏度为104 IU/mL.另外,利用钙黄绿素进行产物检测的效果和电泳结果相当.通过对临床样本分型检测,HCV 1b型样本的RT-LAMP检测结果和荧光定量PCR差异无统计学意义(P＞0.05),HCV 2a型样本的RT-LAMP检测结果和荧光定量PCR差异有统计学意义(P＜0.05),但是未检出的样本中有2例为HCV 2b型.结论 RT-LAMP对HCV的可视化分型检测具有较好的特异性和灵敏度,操作简便,具有在现场或基层医院的应用前景.

关键词：丙型肝炎病毒(HCV)、反转录环介导等温扩增(RT-LAMP)、分型检测

所属期刊栏目：32

分类号：R373(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：全军医药卫生科研基金项目CBJ14C010;the Medicine and Hygiene Research Foundation of the PLACBJ14C010

在线出版日期：2016-07-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：383-387