猪鼻支原体可变脂蛋白家族重组蛋白的构建表达及黏附细胞功能检测

摘要：

目的 本研究以猪鼻支原体表面的可变脂蛋白(vlp)家族为研究对象,鉴定其各成员对宿主细胞的黏附能力.方法 根据已公布的猪鼻支原体vlp家族7种成员的基因序列设计引物,构建重组表达质粒pET-32a(+)/vlp,筛选获得阳性克隆.重组工程菌经IPTG诱导表达目的蛋白,经镍柱亲和层析获得7种纯化的vlp重组蛋白.利用间接免疫荧光法及微孔板定量法分别对vlp各个成员的黏附功能进行鉴定.结果 成功构建了7种重组表达质粒pET-32a(+)/vlp,获得阳性重组工程菌.经IPTG诱导及镍柱亲和层析纯化,获得了较纯的7种vlp重组蛋白.间接免疫荧光及微孔板黏附定量试验检测结果显示,重组蛋白vlpA、vlpB、vlpC、vlpE、vlpG可黏附PK细胞,而重组vlpD和vlpF蛋白黏附能力不明显.结论 本研究成功构建了猪鼻支原体7种vlp的重组蛋白,并对其黏附功能进行了初步鉴定,证明部分vlp属于猪鼻支原体的黏附因子.

关键词：猪鼻支原体、可变脂蛋白、细胞黏附

所属期刊栏目：32

分类号：R375(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：the National Natural Science Foundation of China31300155;the Natural Science Foundation of Jiangsu ProvinceBK20130702;the Special Fund for Independent Innovation of Agricultural Science and Technology in Jiangsu Province of China No.CX145039;国家自然科学基金项目31300155;江苏省自然科学基金项目BK20130702;江苏省农业科技自主创新资金项目No.cx145039

在线出版日期：2016-07-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：338-343