蓝氏贾第鞭毛虫胞外核酸酶的表达纯化和活性鉴定

摘要：

目的 克隆、原核表达蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia,贾第虫)的胞外核酸酶编码区,并对其蛋白产物进行活性鉴定.方法 对贾第虫胞外核酸酶(GeNuc)蛋白进行生物信息学分析,根据分析结果以C2株贾第虫基因组DNA为模板扩增获得GeNuc去信号肽段编码区序列,双酶切连入原核表达载体pET-28a(+),将酶切和测序验证正确的重组质粒转化E.coli Rosetta(DE3),经IPTG诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE及Western blot鉴定蛋白产物.Ni-NTA亲和层析纯化GeNuc蛋白,经复性后验证其对质粒DNA的水解能力.结果 成功克隆了长约800 bp的GeNuc编码区并构建了原核表达载体pET-28a(+)-GeNuc,测序结果显示C2株GeNuc序列与WB株相同;在大肠杆菌中诱导表达获得了相对分子量约30.8 kDa的融合蛋白;复性后的纯化GeNuc蛋白具有降解双链DNA的能力,但活性较商品化DNase Ⅰ低.结论 证明了GeNuc的存在,为GeNuc抗体的制备及贾第虫致病机制的研究提供了实验材料.

关键词：蓝氏贾第鞭毛虫、胞外核酸酶、生物信息学、原核表达、活性鉴定

所属期刊栏目：32

分类号：R382.21(医学寄生虫学)

资助基金：the National Natural Science Foundation of China31471954;the Hebei Province Science Foundation for YouthsC2012401039;国家自然科学基金31471954;河北省青年科学基金C2012401039

在线出版日期：2016-05-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：65-69,82