弓形虫ROP16Ⅰ/ⅢDNA疫苗不能诱导小鼠有效的保护性免疫

摘要：

目的 利用ROP16Ⅰ/Ⅲ基因真核表达重组质粒免疫BALB/c雌性小鼠,检测小鼠体液免疫和细胞免疫,评估ROP16Ⅰ/nⅢ作为潜在的分子疫苗的价值.方法 克隆Chinese 1型弓形虫ROP16Ⅰ/Ⅲ,将其插入真核表达载体pEGFP-C2中构建重组质粒pEGFP-ROP16Ⅰ/Ⅲ,脂质体法转染T293细胞并观察体外表达.Western blotting分析鉴定.将36只SPF级小鼠随机均分为:①PBS组;②空质粒组;③pEGFP-ROP 16 Ⅰ/Ⅲ组.每2周肌注免疫1次(100 μg/只),共3次;于免疫前及每次肌注前1d和末次免疫后2周收集小鼠血清,间接ELISA法检测血清抗弓形虫IgG.于末次免疫2周后取小鼠脾脏,分离淋巴细胞培养测细胞因子.剩余小鼠腹腔注射Chinese 1型弓形虫Wh3株速殖子1 000个/只,观察小鼠攻击感染后的存活时间和存活率.结果 真核表达载体构建成功,体外见到重组质粒pEGFP-ROP 16Ⅰ/Ⅲ在T293细胞的表达;pEGFP-ROP 16 Ⅰ/Ⅲ末次免疫后血清中IgG水平及脾淋巴细胞细胞因子均无明显升高(P＞0.05);攻击感染后,免疫组小鼠比对照组的存活时间无延长(P＞0.05);生物信息学分析发现ROP16Ⅰ/Ⅲ缺乏线性B细胞表位.结论 Chinesel型弓形虫的ROP16Ⅰ/Ⅲ由于其分泌的定位和结构特点,不能诱导小鼠产生有效的抗Wh3株攻击感染的免疫保护.

关键词：弓形虫、ROP16Ⅰ/Ⅲ、分子疫苗

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分类号：R382(医学寄生虫学)

资助基金：国家自然科学基金81471983;国家"973"计划项目2010CB530001;the Funded by the National Natural Science Foundation of China81471983;the National Basic Research Program of China973 Project, 2010CB530001

在线出版日期：2015-12-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1010-1016