粉尘螨铁蛋白的克隆、表达及蛋白特征分析

摘要：

目的：为了获得粉尘螨铁蛋白（ferritin）蛋白，并对该蛋白特征进行分析。方法根据铁蛋白基因已知序列，设计出相应的引物，提取粉尘螨总RNA ，采用RT‐PCR方法扩增出铁蛋白基因，PCR产物克隆入pET32a载体，构建的重组质粒pET32a‐ferritin ，经酶切和测序鉴定后，再转化至大肠杆菌BL21（DE3），异丙基‐β‐D‐硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达。用十二烷基磺酸钠‐聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS‐PAGE）鉴定其表达效果，用 Ni＋离子亲和层析柱纯化其重组蛋白。用生物信息学方法对粉尘螨铁蛋白的特征进行分析。结果成功克隆粉尘螨铁蛋白基因并构建了 pET32a‐ferritin重组质粒；粉尘螨铁蛋白基因开放阅读框为543 bp ，编码179个氨基酸，PI 5．35；SDS‐PAGE结果表明铁蛋白基因在大肠杆菌 Bl21（DE3）中获得良好的表达，经亲和层析纯化后，表达产物分子质量约为20 kD。经生物信息学分析，粉尘螨铁蛋白含有8个丝氨酸激酶、7个苏氨酸激酶、7个酪氨酸激酶、0组氨酸激酶磷酸化位点，亲水区域大于疏水区域，属不稳定蛋白。结论克隆、表达了尘螨铁蛋白，经纯化后获得较高纯度的重组蛋白，并对其三级结构进行分析，为进一步研究尘螨过敏原的结构成分及其理化性质奠定理论基础。

关键词：粉尘螨、铁蛋白、蛋白表达、纯化、生物信息学分析

分类号：R384.4(医学寄生虫学)

资助基金：国家自然科学基金．31328014、31400786;广东省高等学校国际暨港澳台科技合作创新平台项目．2012gjhz0009;深圳市科技计划国际科技合作项目GJHZ20130408174112021;深圳市科技计划基础研究项目．JCYJ20130329110735981、JCYJ20120613173233810;深圳市南山区研发项目No ．KC2012JSYB0003A。Supported by the National Natural Science Foundation of China．31328014 and 31400786;the Guangdong Province Colleges and Universities International and Hong Kong ，Macao and Taiwan Science and Technology Cooperation Inno-vation Platform．2012gjhz0009;the Shenzhen Science and Technology Project--International Scientific and Technological Cooperation Project．GJHZ20130408174112021;the Basic Research Project of Shenzhen Science and Technology Project．JCYJ20130329110735981 and JCYJ20120613173233810;the Nanshan District Shenzhen Research and Development Project．KC2012JSYB0003A

在线出版日期：2015-11-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：927-930,937