铜绿假单胞菌clpP基因缺陷株的构建

摘要：

目的 构建铜绿假单胞菌clpP基因缺陷株.方法 分别以质粒pUCGM和铜绿假单胞菌PAO1基因组为模板PCR扩增庆大霉素抗性基因(GM)和铜绿假单胞菌clpP基因及其3 '、5 '侧翼序列,将clpP基因及其3'、5 '侧翼序列克隆至pMD19T载体,EcoRV切除clpP基因37 bp～453 bp片段后,引入庆大霉素抗性基因,构建重组质粒pCKR2;EcoR Ⅰ/HindⅢ双酶切重组质粒pCKR2,回收FclpP-GM-clpPR片段,与自杀质粒pEX18Tc连接,得到clpP基因缺陷的同源重组载体pCKR3;将pCKR3质粒转化大肠埃希菌SM10,与铜绿假单胞菌PAO1双亲杂交,庆大霉素筛选得到铜绿假单胞菌clpP基因缺陷株.结果 经酶切鉴定同源重组载体pCKR3构建正确;PCR和DNA测序鉴定铜绿假单胞菌clpP基因缺陷株构建成功.结论 本研究成功敲除了铜绿假单胞菌clpP基因,为进一步研究clpP基因的生物学功能奠定了基础.

关键词：铜绿假单胞菌、clpP基因、双亲杂交、同源重组

所属期刊栏目：31

分类号：R378(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基因81000762;福建省自然科学基金2010D018,2013D002;the National Natural Science Fundation81000762;the Natural Science Fund of Fujian Province.2010D018 and 2013D002

在线出版日期：2015-09-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：627-630