Flanders 病毒 TaqMan RT-PCR 检测方法的建立

摘要：

目的：应用TaqMan PCR技术建立针对Flanders病毒（Flanders virus ，FLAV）的实时荧光定量PCR检测方法。方法下载GenBank中FLAV基因序列资料并进行多序列比对分析，选择其L基因中的高保守序列片段进行FLAV特异引物与探针的设计，使用来自于不同科属的15株病毒验证方法特异性，通过重复／平行实验验证方法稳定性，并利用体外转录的L基因RNA标准品建立基因拷贝数绝对定量分析模型。结果引物与探针工作特异性良好，同一样品重复检测Ct值的变异系数均小于1．7％，定量分析模型灵敏度达到100 copies／PCR。结论建立完成针对FLAV的TaqMan PCR检测方法。实验结果显示，本方法具有高特异性、高敏感性、高稳定性、简便、易操作的特点，为今后对 FL A V的检测、监测及相关研究提供技术手段。

关键词：Flanders病毒、TaqMan RT-PCR、分子检测

分类号：R373.9(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家科技重大专项项目No ．2013ZX10004-101李浩、赫晓霞对本文同等贡献Supported by the National Science and Technology Major Project of the Ministry of Science and Technology of China ．2013ZX10004-101

在线出版日期：2015-04-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：212-215