C2株蓝氏贾第鞭毛虫 SU MO特异性蛋白酶基因的克隆、生物信息学分析及其催化活性区的原核表达

摘要：

目的：克隆C2株蓝氏贾第鞭毛虫（Giardia lamblia ，简称贾第虫）的SUMO‐Specific Protease（SENP）基因，并对其序列进行生物信息学分析，原核表达贾第虫SENP的催化活性区。方法提取C2株贾第虫基因组DNA ，以基因组DNA为模板获得SENP编码区全长片段，连入克隆载体pGM‐T ，测序后进行生物信息学分析；根据分析结果克隆SENP的催化活性区，构建其原核表达载体pET‐28a（＋）‐SENPc ，在 E ．coli Rosetta（DE3）中诱导表达，SDS‐PAGE及Western blot观察表达结果。结果成功克隆了C2株贾第虫SENP编码区全长序列，生物信息学分析显示C2株贾第虫SENP蛋白序列与WB株相同，二级结构以无规则卷曲为主，其催化活性区位于126‐497aa ，被一段插入序列分割成两个部分；构建了SENP催化活性区原核表达载体并在大肠杆菌中高效表达，在相对分子量约43 kD的位置出现目的蛋白条带，与理论值相符。结论成功克隆了贾第虫SENP基因并原核表达了其催化活性区，为贾第虫SENP蛋白功能的研究提供了基础。

关键词：蓝氏贾第鞭毛虫、SUMO特异性蛋白酶、原核表达、生物信息学

分类号：R382.21(医学寄生虫学)

资助基金：国家自然科学基金．31471954;河北省青年科学基金No ． C2012401039联合资助Supported by the National Natural Science Foundation of China．31471954;the Hebei Province Science Foundation for Youths．C2012401039

在线出版日期：2015-04-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：203-207