10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2014.07.008
刚地弓形虫MIC2与醛缩酶作用位点的鉴定
目的:确定刚地弓形虫微线体蛋白2(M IC2)与醛缩酶的作用位点。方法利用定点突变技术,将M IC2羧基端(MIC2C)的767位色氨酸(W767)突变为丙氨酸(A)。PCR扩增MIC2C W/A突变体基因片段;构建MIC2C W/A/pGEX-4T-1重组原核表达系统,IPTG诱导表达GST-MIC2C W/A突变体蛋白。分别以该蛋白和GST-MIC2C蛋白(对照蛋白)作为探针蛋白与弓形虫速殖子裂解液进行GST pull-down实验,SDS-PAGE及Western blot分析。结果获得了MIC2C W/A突变体基因片段,制备了GST-MIC2C W/A突变体蛋白;GST-MIC2C蛋白的pull-down产物中有一蛋白条带,而且可以被醛缩酶抗体识别,而GST-MIC2C W/A蛋白的pull-down产物中未见蛋白条带。结论将MIC2的W767突变为A后,MIC2失去与醛缩酶的作用,即M IC2与醛缩酶的作用位点为色氨酸(W )。
刚地弓形虫、微线体蛋白2、醛缩酶、点突变、GST pull-down
R382.5(医学寄生虫学)
河南省科技攻关计划项目No .112102310209;河南省教育厅自然科学研究项目No .2012B310019;新乡医学院博士科研启动基金2010
2014-08-23(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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698-700,708