1株 asdA缺陷型减毒鼠伤寒沙门氏菌作为核酸疫苗载体的构建与鉴定

摘要：

目的：利用载体-宿主平衡致死系统，将1株香港分离的野生型沙门氏菌（S129）构建为减毒核酸疫苗载体。方法以细菌生化反应和血清学方法鉴定S129为鼠伤寒沙门氏菌；以λ-RED同源重组方法靶向敲除S129株的 asdA基因，并以卡那霉素抗性基因代替；通过菌落PCR鉴定后挑取阳性克隆 asdA缺陷型减毒鼠伤寒沙门氏菌（asdAΔS129），在含2，6-二氨基庚二酸（2，6-diaminopimelic acid ，DAP）或无DAP的LB培养基中培养，与野生株S129对比生长曲线以验证 asdAΔS129构建的成功；以S129和 asdAΔS129攻击BALB/c小鼠验证 asdAΔS129减毒情况；结果菌落PCR鉴定得到阳性克隆，asdAΔS129必需外源性添加DAP方能生长；asdAΔS129不能致死BALB/c小鼠，得到成功的减毒；结论成功将1株野生型沙门氏菌构建成 as d A缺陷型减毒核酸疫苗载体，并在体外和体内实验中验证，为下一步的疫苗呈递和肿瘤治疗实验提供了合适的载体。

关键词：减毒鼠伤寒沙门氏菌、核酸疫苗载体、λ-RED同源重组

分类号：Q939.93(微生物学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目No ．31200639

在线出版日期：2014-08-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：663-668