白纹伊蚊唾液腺serpin1基因的可变剪接分析与原核表达

摘要：

目的 克隆并原核表达白纹伊蚊唾液腺丝氨酸蛋白酶抑制剂基因1(Aalbserpin-1).方法 根据NCBI网站上白纹伊蚊Aalbserpin-1(AY826096.1)的序列设计引物,用RT-PCR从白纹伊蚊广州株中获取Aalbserpin-1全长基因序列,并进行生物信息学分析.将目的片段克隆到原核表达载体pET28a(+),转化到大肠杆菌中诱导表达.利用实时荧光定量RT-PCR分析Aalbserpin-1_2基因在白纹伊蚊不同组织中的表达差异.结果 PCR扩增获得Aalbserpin-1基因两个转录本(Aalbserpin1_1和Aalbserpin1_2),Aalbserpin1_1的基因序列为1 260 bp,编码419个氨基酸;Aalbserpin1_2的基因序列为1 332 bp,编码443个氨基酸,均具有seprin结构域,Aalbserpin1_1和Aalbserpin1_2与Aalbserpin-1(AY826096.1)相比,相似性分别为95％和90％.两个转录本比较,Aalbserpin1_2中含有24个氨基酸的可变剪接子正好位于其功能活性中心环(RCL)上.以Aalbserpin1_2序列为模板,成功构建pET28a-Aalbserpin-1_2重组质粒.SDS-PAGE结果显示目的基因在Ori-gami(DE3)中表达,重组蛋白相对分子量(Mr)约为50 000 Da,经亲和层析获得目的蛋白.组织表达谱显示Aalbserpin-1_2在唾液腺(SG)、中肠(MG,P＞0.05)丰富表达,脂肪体低表达(FB,P＜0.05).结论 白纹伊蚊广州株Aalbserpin-1基因具有两个可变剪接子,其中Aalbserpin-1_2在唾液腺、中肠丰富表达,成功构建pET28a-Aalbserpin-1_2重组质粒并获得重组蛋白.

关键词：丝氨酸蛋白酶抑制剂、可变剪接子、克隆表达、白纹伊蚊

所属期刊栏目：30

分类号：R384(医学寄生虫学)

资助基金：the the National Natural Science Foundation of China.30600515 & 81060138;the Guizhou Provincial University of Outstanding Innovation Talents in Science and Technology Program No.[2012]449国家自然科学基金30600515,81060138;贵州省高校优秀科技创新人才支持计划黔教研发[2012]449

在线出版日期：2014-06-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：473-478