结核分枝杆菌优势蛋白ppe37的表达纯化以及对巨噬细胞NF-κB、TNF-α、IL-6m RNA表达的影响

摘要：

目的 研究在结核分枝杆菌感染过程中,ppe37蛋白引起的巨噬细胞免疫应答反应.方法 利用本实验室已构建好的ppe37原核表达载体,将其转化到大肠杆菌E.col BL21中,用IPTG诱导表达后,经SDS-PAGE与Western blot鉴定后,利用Ni-Agarose His标签蛋白纯化试剂金对重组蛋白进行纯化并复性.利用SDS-PAGE和AlpHaImager 2200软件对纯化蛋白进行鉴定与分析.分别用浓度为100 ng/ mL、500 ng/mL、5 000 ng/mL的重组ppe37蛋白刺激RAW264.7巨噬细胞,24 h、48 h、72 h后,用Real-time PCR检测RAW264.7巨噬细胞NFκB、TNF-α、IL-6 mRNA的表达量的变化.结果 SDSPAGE鉴定显示,重组ppe37蛋白获得了大量表达,其相对分子质量约为50 kDa.经Western Blot验证,重组ppe37蛋白可与抗His单抗发生特异性反应,经AlpHaImager 2200软件薄层扫描分析,重组蛋白的纯度为96.2％,并成功的进行了蛋白复性.浓度分别为100 ng/ mL,500 ng/ mL,5 000 ng/ mL的重组ppe37蛋白刺激巨噬细胞,24 h后Real-Time PCR检测结果显示与空白对照组相比NF-κB、TNF α mRNA的表达没有影响(P＞0.05),而IL-6 mRNA的表达上调(P＜0.05)；48 h、72 h后NF κB、TNF-α 、IL-6 mRNA的表达显著上调(P＜0.05).结论 成功地制备并纯化了重组ppe37蛋白,重组ppe37蛋白能够活化巨噬细胞,激活细胞免疫反应,并促使巨噬细胞发生炎性反应.

关键词：结核分枝杆菌、ppe37蛋白、RAW264.7巨噬细胞

所属期刊栏目：29

分类号：R378(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基因31160494;2011年教育部"新世纪优秀人才支持计划"项目No.NCET 11-11023宁夏高等学校科学技术研究项目2010;the Natural Science Foundation of China31160494;the Program for New Century Excellent Talents in UniversityNCET 11-11023;the Science and Technology Research Project of Ningxia Colleges and Universities2010

在线出版日期：2013-10-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：803-807