C2株蓝氏贾第鞭毛虫SUMO基因的克隆、原核表达和生物信息学分析

摘要：

目的 克隆、原核表达C2株蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia,简称贾第虫)的小泛素相关修饰物(small ubiquit in-related modifier,SUMO)蛋白,并对其序列进行生物信息学分析.方法 提取C2株贾第虫基因组DNA,以基因组DNA为模板PCR获得SUMO基因片段,双酶切连入原核表达载体pET28a(+),经测序验证并进行生物信息学分析,将重组质粒pET 28a(+)-SUMO转化大肠杆菌Rosetta(DE3).IPTG诱导后收集菌体,裂解后进行SDS-PAGE及Western blot检测.结果 成功构建了C2株贾第虫SUMO基因原核表达载体pET 28a(+)-SUMO,经IPTG诱导后,在大肠杆菌中高效表达,SDSPAGE及Western blot分析显示,在相对分子量约12.7 kD的位置出现目的蛋白条带,与理论值相符；生物信息学分析显示C2株贾第虫SUMO序列与WB株相同,其蛋白形成类似“泛素折叠”样结构,进化分析表明贾第虫SUMO蛋白与其它现存真核生物亲缘关系较远.结论 成功地克隆、表达了贾第虫SUMO蛋白,明确了该蛋白的空间结构和进化地位,为贾第虫SUMO蛋白抗体的制备及相关蛋白功能的研究提供了基础.

关键词：蓝氏贾第鞭毛虫、SUMO、原核表达、生物信息学

所属期刊栏目：29

分类号：R382(医学寄生虫学)

资助基金：the National Natural Science Foundation of China30970313;the Hebei Province Science Foundation for YouthsC2012401039;国家自然科学基金30970313;河北省青年科学基金C2012401039

在线出版日期：2013-10-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：785-790