结核分枝杆菌Ag85A和Ag85B基因真核共表达载体的构建与表达

摘要：

目的 Ag85A和Ag85B是结核分枝杆菌的主要优势保护抗原,为提高编码Ag85A和Ag85B DNA疫苗的免疫原性和免疫效果,特构建真核共表达Ag85A和Ag85B抗原的真核表达载体pcDNA-Ag85A IRES-Ag85B,并利用293T细胞对其表达进行检测.方法 PCR扩增Ag85A和Ag85B基因,逐步将Ag85A和Ag85B基因定向插入至质粒pcDNA3.1(+)多克隆位点CMV启动子与加A信号BGH poly(A)之间,并将Ag85A和Ag85B基因以内部核糖体进入位点(internal ribo some entry site,IRES)序列连接,酶切和测序验证后将重组质粒转染至293T细胞中进行真核表达,48 h后提取细胞总蛋白,表达产物经SDS-PAGE分离和Western blot分析.结果 限制性内切酶酶切及测序结果表明,重组质粒pcDNA-Ag85AIRES-Ag85B基因序列和阅读框架正确.将重组质粒转入293T细胞后,利用Ag85A和Ag85B特异性抗体Western blot检测证实两种抗原可在同一载体中各自独立表达.结论 成功构建了能够同时独立表达结核分枝杆菌Ag85A和Ag85B抗原基因的真核表达载体pcDNA-Ag85A IRES-Ag85B,为下一步研究它们的免疫原性和免疫效果奠定了基础.

关键词：结核分枝杆菌、Ag85A、Ag85B、共表达、Western blot

所属期刊栏目：29

分类号：R378.91(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：the National Key Basic Research Program of China 973 Program.2012CB126301 & 2012CB518801;the National Natural Science Foundation of China31160515;the Research Fund for the Doctoral Program of Higher Educationof China20126401110001;国家重点基础研究发展规划项目973计划.2012CB126301 & 2012CB518801;国家自然科学基金项目31160515;高等学校博士学科点专项科研基金资助课题20126401110001

在线出版日期：2013-10-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：780-784