弓形虫棒状体蛋白18的原核表达及免疫分析

摘要：

目的 克隆刚地弓形虫ROP18基因,进行原核表达及重组蛋白的免疫分析.方法 提取弓形虫RH株基因组DNA,经PCR获得ROP18基因片段,经双酶切分别连入原核表达载体pET-28a(+)和pET-32a(+),构建重组表达载体pET28a-ROP18和pET32a-ROP18,并转化大肠杆菌BL21(DE3).IPTG诱导表达后,收集菌体进行SDS-PAGE电泳及Western-blot检测.结果 PCR得到约1 665 bp目的 基因片段,单、双酶切及PCR鉴定结果显示成功构建重组表达载体pET28a-ROP18和pET32a-ROP18;经IPTG诱导后,ROP18基因在大肠杆菌中高效表达;SDS-PAGE电泳及Western-blot分析显示,pET28a-ROP18在相对分子质量约60 kD的位置出现目的 蛋白条带,pET32a-ROP18在相对分子质量约83 kD的位置出现目的 蛋白条带,均与理论值相符;Western-blot结果显示重组蛋白与弓形虫慢性感染小鼠血清具有特异免疫反应性.结论 成功克隆和表达了ROP18基因,所表达的重组蛋白具有免疫效应,为其功能研究奠定基础.

关键词：刚地弓形虫、棒状体蛋白18、基因克隆、原核表达、免疫分析

所属期刊栏目：29

分类号：R382.5(医学寄生虫学)

资助基金：国家自然科学基金30972578,31030066;教育部博士点项目20094433120013,20094433120016;广东省自然科学基金9151051501000075;广东省"大学生创新实验计划"项目1212110025,1212110027;南方医科大学大学生课外科研项目.2010kw082,GWXS20110101,GWXS20110205

在线出版日期：2013-04-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：211-215