犬钩虫(Ancylostoma caninum)daf-1基因的克隆和表达鉴定

摘要：

目的 对犬钩虫(Ancylostoma caninum)TGF-βⅠ型受体daf-1基因进行了克隆和鉴定,并在原核系统中进行表达.方法 以犬钩虫总RNA为模板,用RT-PCR对犬钩虫TGF-β受体基因daf-1的cDNA进行扩增和克隆,用PCR筛选阳性克隆,双酶切鉴定并测序.将测序正确的阳性克隆双酶切后构建到表达载体pET-32m中,转化到E.coli DH5α内,提取质粒,酶切鉴定阳性,再转化入表达宿主E.coli BL21(DE3)菌株内,对转化菌株用IPTG进行诱导培养.收集培养液,破菌、离心进行SDS-PAGE检测重组蛋白的表达.蛋白纯化后进行免疫,并通过免疫印迹检测在钩虫各时期的表达.结果 电泳发现转化了重组质粒的菌株在IPTG诱导下表达的重组蛋白为58 kDa,在钩虫各时期都有AcDAF-1的表达.结论 成功进行了犬钩虫TGF-βⅠ型受体daf-1基因的扩增、克隆和表达并在各期检测到该蛋白的表达.

关键词：犬钩虫、TGF-βⅠ型受体、Acdaf-1、克隆、表达

所属期刊栏目：29

分类号：R383(医学寄生虫学)

资助基金：国家自然科学基金 No.30972181 资助

在线出版日期：2013-04-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：64-68