粉尘螨Ⅰ类变应原瞬时表达载体的构建及其在烟草中的表达

摘要：

目的 构建粉尘螨I类变应原瞬时表达载体TRBO-Der f 1并观察其在烟草中的表达.方法 以粉尘螨总RNA为模板,采用RT-PCR方法 扩增Der f 1基因并定向克隆到瞬时表达载体TRBO中,转化根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)GV1301株后,抽提质粒进行酶切及PCR鉴定.将含TRBO-Der f 1重组质粒的GV1301注射本氏烟叶片,SDS-PAGE电泳检测注射3、4、5、6 d后Der f 1的表达,并进行Western blot鉴定.结果 电泳及测序表明Der f 1基因克隆成功,大小为627 bp.经PCR及酶切结果 证实重组质粒TRBO-Der f 1成功转入根癌农杆菌.SDS-PAGE电泳检测表明,该蛋白于第5和6 d在烟草叶片中高表达,并通过Western blot得到验证.结论 粉尘螨I类变应原Der f 1成功表达于烟草叶片,为进一步研究源于植物的粉尘螨疫苗奠定了基础.

关键词：粉尘螨、瞬时表达、本氏烟、重组质粒

所属期刊栏目：28

分类号：R384.4(医学寄生虫学)

资助基金：国家自然科学基金30872367、81172790;安徽省自然科学基金070413088

在线出版日期：2013-01-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1088-1092