弓形虫ROP5基因真核表达载体的构建及其免疫保护性的研究

摘要：

目的 构建弓形虫pcDNA-ROP5真核表达载体,观察弓形虫ROP5基因在小鼠体内诱导的免疫反应.方法 克隆弓形虫ROP5基因,将其插入真核表达载体pcDNA-3.1中构建重组质粒pcDNA-ROP5,脂质体法转染Hela细胞体外表达蛋白,蛋白质印迹(Western blotting)分析鉴定.将45只小鼠随机均分为3组,分别为PBS组、空质粒组、pcDNA3.1-ROP5组,每2 w肌注免疫(100 μg/只)1次,共3次,于免疫前及每次免疫前1 d和末次免疫后2 w收集小鼠血清,用间接ELISA法检测血清抗弓形虫的IgG.各组小鼠腹腔注射RH株弓形虫速殖子1 000个/每鼠,观察小鼠受攻击感染后的存活时间.结果 真核表达载体构建成功,Western blotting分析结果显示,重组质粒pcDNA3.1-ROP5能在Hela细胞表达,蛋白相对分子质量为61 kDa.pcDNA3.1-ROP5末次免疫后血清中IgG水平显著高于其他组,pcDNA-ROP5免疫的小鼠与对照组相比,实验组小鼠产生了明显的体液免疫应答.攻击感染试验中,实验组的小鼠比对照组的存活时间有明显延长.结论 构建的真核表达重组质粒pcDNA-ROP5对抗击弓形虫攻击感染能够激发一定的免疫保护性.

关键词：弓形虫、ROP5、真核表达质粒、免疫保护

所属期刊栏目：28

分类号：R382.5(医学寄生虫学)

资助基金：海南省自然科学基金809018

在线出版日期：2012-10-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：947-950