微小隐孢子虫亲环素型肽脯氨酰顺反异构酶基因克隆与分析

摘要：

目的 克隆微小隐孢子虫(C.parvum)南京株(NJ) 亲环素型肽脯氨酰顺反异构酶基因,测序并分析C.parvum NJ株与其他隐孢子虫分离株CyP-type PPIase基因序列的差异以及亲缘关系.方法 根据GenBank上C.parvum Iowa II株CyP-type PPIase基因序列,设计2对引物,应用巢式PCR扩增目的 基因,并将其克隆入pMD18-T载体,对重组子进行双酶切和菌落PCR鉴定并测序,应用生物信息学方法分析C.parvum NJ株CyP-type PPIase基因与其它隐孢子虫株的核苷酸和氨基酸序列差异.结果 巢式PCR扩增获得特异的目的 基因,双酶切和菌落PCR鉴定获得正确的重组子,测序表明,扩增基因组DNA序列为746 bp,含有目的 基因ORF全长570 bp,编码190个氨基酸.序列分析表明,我国C.parvum NJ 株与国外分离的Iowa II 株CyP-type PPIase基因的氨基酸序列具有99%的同源性.进化树分析表明,C.parvum NJ株与Iowa II 株CyP-type PPIase基因之间的亲缘关系最近,与脑膜炎双球菌的亲缘关系最远.结论 成功克隆C.parvum CyP-type PPIase基因,C.parvum CyP-type PPIase基因在氨基酸水平高度保守.

关键词：微小隐孢子虫、亲环素型肽脯氨酰顺反异构酶基因、克隆

所属期刊栏目：28

分类号：R382.3(医学寄生虫学)

资助基金：国家自然科学基金30901249,81101267;广东省自然科学基金10151063201000036,S2011010002526;广东省医学科研基金B2007097

在线出版日期：2012-10-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：885-889