长角血蜱谷胱甘肽过氧化物酶的克隆与原核表达

摘要：

目的 长角血蜱(Hemaphysalis longicornis)不仅吸食家畜血甚至人血,还是多种疾病的传播媒介,对该蜱的研究具有重要的医学和兽医学意义.在大肠杆菌中表达长角血蜱的谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase)(HlGPx),为该酶在长角血蜱中的生理作用研究奠定基础,为该病媒的免疫防控提供参考.方法 根据长角血蜱EST文库提示的片段序列的信息,设计引物采用PCR方法从长角血蜱成蜱的cDNA中扩增谷胱甘肽过氧化物酶基因.利用定点突变将该基因编码序列中一个编码硒半胱氨酸的密码子TGA突变为通用半胱氨酸密码子TGC,与表达载体pGEX-4T-1重组,转化BL21(DE3)pLysS,IPTG诱导表达,SDS-PAGE及免疫印迹分析.结果 成功获得了长角血蜱谷胱甘肽过氧化物酶全长序列,突变后在大肠杆菌中诱导表达了约51kDa的重组蛋白,Western-blot显示表达产物与抗GST抗体有很强的交叉反应.结论 突变的HlGPx可以在大肠杆菌中表达并可用于下一步制备免疫血清及功能分析.

关键词：长角血蜱、谷胱甘肽过氧化物酶、生物信息学分析、克隆、定点突变、原核表达、Western印迹

所属期刊栏目：28

分类号：S852.7(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家级生物学实验教学示范中心本科生创新性研究计划项目02011520;国家自然科学基金项目31101032,31040084;福建省自然科学基金项目No.2010J01145,2008J0004联合资助 Supported by the Innovative Research Project for Undergraduates from College of Life Science,Fujian Normal University02011520;the Natural Science Foundation of Fujian Province2010J01145 and 2008J0004;the Natural Science Fundation of China31101032 and 31040084

在线出版日期：2012-10-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：861-868