家蝇几丁质酶基因的序列分析、克隆和诱导表达

摘要：

目的 对EST筛选得到的家蝇几丁质酶Ⅰ(MDC Ⅰ)基因进行序列分析,克隆其eDNA序列并在大肠杆菌中表达.方法 采用EST测序技术从已构建的家蝇幼虫cDNA质粒文库中筛选到MDC Ⅰ基因,对其进行序列测定和分析.以该基因的cDNA文库质粒为模板,通过PCR方法对MDC Ⅰ基因进行扩增,以pET 28a(+)为载体构建重组质粒,再转化到表达宿主菌大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达.表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定.结果 MDC Ⅰ基因全长751 bp,编码251个氨基酸,理论分子量28,62家kDa;等电点5.78,有1个chitinase 18家族的活性位点.构建了具有正确基因序列的MDCⅠ重组表达质粒,重组蛋白在大肠杆菌BL21( DE3)中表达.结论 MDCⅠ基因可在原核表达系统中表达,为进一步研究该蛋白的生物学、免疫学活性奠定了基础.

关键词：家蝇、几丁质酶、序列分析、基因克隆、表达

所属期刊栏目：28

分类号：R37(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金81160204,30960343;贵州省科技厅基金黔科合[2010]3160;高校博士点学科专项科研基金20105215120001

在线出版日期：2012-10-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：570-573