肺孢子虫(菌)p55抗原嵌合基因的克隆及表达产物分析

摘要：

目的 构建肺孢子虫(菌)p55蛋白嵌合基因的原核表达载体,分析、鉴定及纯化表达产物.方法 自NCBI网站的蛋白数据库中获取p55抗原及4个变异体信息,运用生物信息学方法预测可能的抗原表位,设计包含多个可能抗原表位的多肽,根据遗传中心法则及大肠杆菌密码子偏好性进行密码子优化,将氨基酸序列转化为核苷酸序列,将人工合成的嵌合基因(CAG)片段连接到质粒pGEX-6p-1(含GST标签)上,构建原核表达载体pGEX-6p-1/CAG,酶切、测序鉴定.pGEX-6p-1/CAG转化大肠杆菌,异丙基-βD硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组融合蛋白CAG-GST.表达产物用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及Western-blotting分析鉴定.结果 双酶切及测序结果显示重组质粒pGEX-6p-1/CAG构建成功.SDSPAGE显示重组融合蛋白相对分子量约为69 000.Western-blotting结果显示,表达的融合蛋白为CAG-GST.结论 成功构建表达p55蛋白嵌合基因的原核表达载体pGEX-6p-1/CAG,建立表达重组蛋白的原核表达系统.

关键词：肺孢子菌、p55蛋白、嵌合基因、重组融合蛋白

所属期刊栏目：27

分类号：R382.3(医学寄生虫学)

资助基金：国家自然基金资助项目30670916;留学回国人员科研启动基金资助项目[2010] 1174;辽宁省教育厅项目L2010579

在线出版日期：2011-12-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：774-777,786